新版GMP要求，需對環(huán)境及不同階段產(chǎn)品監(jiān)控的微生物進(jìn)行鑒定，并建立污染菌種庫，便于對日常監(jiān)測中出現(xiàn)異常菌株與菌種庫進(jìn)行比對，查找其來源，以便采取有效措施。

通常，潔凈區(qū)里典型的污染菌主要來源如下：

• 人體表面：革蘭氏陽性球菌為主

• 其次是環(huán)境：革蘭氏陽性桿菌為主

• 和各種水源：革蘭氏陰性桿菌為主的微生物

數(shù)據(jù)表明，在所有級別的潔凈區(qū)中，檢出菌類別的比例大概如下：

檢出菌的鑒定在無菌保障工藝中非常重要，可以反映出許多細(xì)節(jié)。

舉例如下：

1、當(dāng)潔凈區(qū)檢出菌的類別以革蘭氏陽性球菌屬為主的情況下，大致符合上述比例，表明潔凈室繼續(xù)在正常范圍內(nèi)起作用，不必過分擔(dān)憂。

2、潔凈區(qū)檢出菌中，皮膚相關(guān)的微生物最常見，微球菌屬和葡萄球菌屬占50%以上，第二個最常見的屬是芽孢桿菌屬約占13%。

雖然革蘭氏陽性微生物在潔凈室中普遍存在，但其實對于葡萄球菌和微球菌屬，多是人類身上固有的微生物。應(yīng)注意調(diào)查此部分微生物的被采集者，加強(qiáng)培訓(xùn)，提高人員的無菌意識，規(guī)范人員更衣程序和潔凈區(qū)行為。

3、微球菌屬中藤黃微球菌檢出率最高，它是藥物環(huán)境監(jiān)測中最常見的微生物之一。通常與人體皮膚有關(guān)，尤其是與頭部，手臂和腿部。無菌技術(shù)的缺陷以及潔凈室管理不善是藤黃微球菌污染的常見原因。

4、芽孢桿菌屬中蠟狀芽孢桿菌檢出率最高，蠟狀芽孢桿菌的孢子通常被確定為最難消毒和根除的。根據(jù)檢出地點，應(yīng)引起足夠重視。

5、丙酸桿菌和棒狀菌毋庸置疑來自于人體。

但當(dāng)某短時間在高級別潔凈室中頻繁檢出如人表皮葡萄球菌屬、丙酸桿菌屬等來自于人體的微生物，應(yīng)注意在生產(chǎn)過程中規(guī)范人員更衣程序和潔凈區(qū)行為。或者評估所穿潔凈服的過濾能力，潔凈服由于反復(fù)滅菌使用，并無法保證所有重復(fù)使用的潔凈服都具有相同的過濾性能。

6、革蘭氏陽性桿菌出現(xiàn)在物體表面的頻率更高。

與 A、B級潔凈區(qū)相比，C、D級潔凈室中，革蘭氏陽性桿菌的數(shù)量相對較高，這符合正常現(xiàn)象，因為物品進(jìn)入低級潔凈室的清潔消毒程序往往較不嚴(yán)格。

7、潔凈區(qū)中革蘭氏陰性桿菌的比例指示水源污染程度。

在D級潔凈室中， 革蘭氏陰性桿菌占分離物的比例要大得多。這也反映了在這些地方水槽（水源）較多。

若在A、B潔凈室中革蘭氏陰性桿菌的比例較高，應(yīng)引起重視。可能與潔凈室濕度設(shè)置過高有關(guān)，或部分水漬未及時清理擦干，也存在制藥用水過濾除菌不夠徹底的可能。企業(yè)可以實行無水化管理。

8、絕大多數(shù)來自潔凈區(qū)的細(xì)菌是中溫好氧或兼性需氧菌。但在使用特殊氣體與冷凍干燥機(jī)相關(guān)聯(lián)的情況下，部分細(xì)菌可在厭氧條件下生長并被發(fā)現(xiàn)。

如痤瘡丙酸桿菌可能在凍干制品中被發(fā)現(xiàn)，因為本菌為厭氧或兼性厭氧，是無菌灌封中令人頭痛的一種微生物，根據(jù)經(jīng)驗，該微生物直到在培養(yǎng)基中培養(yǎng)12 天后才能生長到肉眼可以觀察的濃度。

9、芽孢污染是制藥企業(yè)車間較為嚴(yán)重的污染之一，應(yīng)注意每月交替更換消毒劑，使用殺孢子劑定期殺滅芽孢。

10、潔凈區(qū)中真菌的檢出率也很低。如果真菌的發(fā)生率較高，鑒于真菌的生長特性，反映了一些潔凈室的濕度較高或者通風(fēng)不良。

特別每年梅雨季節(jié)時，空氣濕度大，真菌可能快速生長繁殖，如果物品傳遞、脫包消毒程序不夠完善，未經(jīng)處理的外氣流流入，以及物品和人員，都有可能攜帶微生物進(jìn)入潔凈區(qū)。

潔凈室一旦有大量真菌污染，采用紫外消毒或消毒液不易殺滅，以致無菌保障水平得到嚴(yán)重破壞，應(yīng)當(dāng)重視潔凈區(qū)真菌污染。

最后，潔凈區(qū)檢出菌所反應(yīng)出的信息遠(yuǎn)不止上述內(nèi)容，我們目前還只是管中窺豹。無菌保障工藝中關(guān)鍵的方面，是將污染數(shù)據(jù)與污染控制措施相關(guān)聯(lián)。重點分析微生物趨勢并采取相應(yīng)措施。

通過檢出菌鑒別盡可能找到污染源，消除或減少污染源頭的風(fēng)險比依靠空氣過濾或清潔程序更有意義。